Nephrat II是一种酶联免疫吸附测定（ELISA），用于定量测量生物样本中的大鼠白蛋白浓度。

预期用途 ：

Nephrat II专为尿液样本设计，但也可轻松适应其他生物样本。该检测用于研究应用，不适用于诊断用途。

技术背景

Nephrat II是一种直接抗体捕获竞争性检测。Nephrat II检测板涂有大鼠白蛋白（r白蛋白），这是固定相或吸附相抗原。将含有r白蛋白的样本加入板中，这些样本提供移动相中的抗原。随后，将抗r白蛋白抗体-HRP偶联物加入板中。

偶联物中的抗体部分会与固定相中的大鼠白蛋白或移动相中的白蛋白结合，因此称为竞争性结合。移动相中未反应的试剂和免疫复合物随后被洗去，只有与吸附相抗原结合的偶联物会保留下来。

使用TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）作为HRP的显色底物来测定结合的偶联物。将其加入板中，颜色会在5-20分钟内显现。通过加入稀酸终止反应。

通过运行标准品的系列稀释液与样本一起进行检测，以标准化检测。使用酶标仪在450 nm处测量含有稀释标准品和样本的孔的吸光度。

颜色强度与移动相中r白蛋白浓度的对数成反比。因此，含有高浓度r白蛋白的（移动相）样本会产生浅色孔，而几乎不含或不含r白蛋白的样本则会呈现深色。通过模拟标准品的剂量-反应曲线，并根据测量的吸光度计算未知样本浓度，从而获得定量结果。

样本采集与储存

采集样本时不要添加防腐剂，并在必要时通过离心澄清。澄清后的尿液可在4ºC下保存长达1周，或在-60ºC下保存长达2个月。在检测前，让样本恢复至室温。解冻冷冻样本时不要加热。

艾美捷Ethos Biosciences-Nephrat II(大鼠白蛋白ELISA)【#NR002】组成 ：

1. 2块96孔Nephrat II检测板

2. 1瓶1.8 mL大鼠血清白蛋白（RSA）标准品

3. 2瓶12 mL NHEBSA（稀释液）

4. 2瓶12 mL抗RSA抗体-HRP

5. 2瓶12 mL TMB显色剂

6. 2瓶12 mL酸性终止液

NHEBSA、RSA标准品和HRP偶联物均含有防腐剂（异噻唑啉酮）。TMB显色剂含有甲醇、二甲基亚砜、丙酮、3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢。终止液含有稀硫酸。这些试剂可能存在接触危害，应遵循常规实验室安全程序。试剂盒各组分即开即用，但在开始检测前应恢复至室温。只需在开始前将试剂盒组分放置在实验台上1小时即可。检测板为干板，但无需预处理即可用于检测。将对照品、标准品、样本和HRP偶联物直接加入板中。

检测步骤

检测需要将对照品、标准品和样本加入板中。检测体积为100 µL。这些添加应使用适当的移液器完成，即可调节至100 µL的移液器。对于样本稀释，将10 µL样本加入90 µL稀释液中，这需要可设置为这些体积的移液器。HRP偶联物按每孔100 µL加入。最好使用多通道移液器完成此操作。

加入HRP偶联物后，将板孵育30分钟。为确保板处于稳定的环境中，应在密闭容器中进行孵育，该容器处于湿润的环境中。使用一个塑料容器（如Tupperware），在容器底部放置一条湿润的纸巾，已被证明是一个满意的孵育箱。

30分钟后，通过洗涤板去除溶液相中未反应的试剂和r白蛋白-抗r白蛋白PAb-HRP偶联物复合物。对于大多数实验室，冷水自来水可作为洗涤缓冲液。如果洗涤池有限，可使用洗涤缓冲液洗涤检测板。推荐使用Ethos的TEA洗涤缓冲液。

检测的最后一步是使用HRP底物TMB。将其按每孔100 µL加入。经过适当的显色时间后，使用稀硫酸终止反应。这两个步骤都应使用多通道移液器完成。

艾美捷科技是Ethos Biosciences的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。